蛋白印跡（Western blot）是一種生物化學實驗技術，用于檢測并分析特定蛋白質在復雜蛋白混合物中的存在和相對豐度。以下是關于蛋白印跡儀的原理、特點、應用和操作規(guī)程的常見信息：
原理
- SDS-PAGE分離：首先，使用SDS-PAGE凝膠電泳將待測蛋白樣品進行分離。
- 轉移：將凝膠中的蛋白轉移到硝酸纖維素或聚偏氟乙烯膜（PVDF）。
- 阻斷：膜上的非特異性結合位點通過孵育含有蛋白質的阻斷溶液來阻止非特異性結合。
- 孵育：在膜上加入特異性的一抗，結合到膜上的目標蛋白。
- 探針結合：加入特異性的二抗，結合到一抗上，并連接著熒光素酶或輻射標記的免疫金或其他探針。
- 信號檢測：通過熒光素酶或輻射標記的免疫金或其他探針來檢測目標蛋白。
特點
- 高靈敏度：能夠檢測目標蛋白的微量水平。
- 高特異性：能夠精確識別目標蛋白。
- 廣泛適用：適用于各種類型的蛋白質。
- 定量性：能夠定量分析蛋白的相對表達水平。
應用
- 生物醫(yī)學研究：用于檢測和量化細胞中的特定蛋白，以了解蛋白在生理和病理過程中的表達和功能。
- 藥物研發(fā)：用于評估藥物對蛋白表達的影響，以及研究藥物分子與蛋白的相互作用。
- 臨床診斷：用于診斷疾病、監(jiān)測治療效果和疾病進展。
操作規(guī)程
- 樣品處理：準備樣品并進行必要的樣品處理，如蛋白提取和濃縮。
- 準備蛋白電泳：進行SDS-PAGE凝膠電泳分離蛋白。
- 膜轉印：將分離的蛋白轉移到膜上。
- 阻斷：在膜上進行非特異性結合位點的阻斷。
- 一抗和二抗孵育：依次孵育特異性的一抗和二抗。
- 信號檢測：通過熒光素酶、輻射標記的免疫金或其他探針檢測目標蛋白。
在操作過程中需要注意標本的處理，蛋白電泳的進行，膜轉移的條件以及蛋白的檢測方式等細節(jié)，確保實驗的可靠性和準確性。
